Karşılaştırmalı genomik hibridizasyon

Karşılaştırmalı genomik hibridizasyon (İngilizce, Karşılaştırmalı genomik hibridizasyon veya CGH ) kopya sayısında değişimleri analiz moleküler sitogenetik bir tekniktir DNA .

Prensip

İnsanlar gibi diploid bir organizmada , her DNA segmenti iki kopya halinde bulunabilir: bir çiftin iki kromozomunun her birinde bir kopya bulunur . Bazı patolojilerde kopya sayısı değişebilir: örneğin çoğaltma durumunda artabilir ve silme durumunda azalabilir . Karşılaştırmalı genomik hibridizasyon, bu patolojileri teşhis etmeyi ve ilgili kromozomal bölgeleri tanımlamayı mümkün kılar .

Yöntem

Probların işaretlenmesi

Bir hastadan alınan DNA , normal dokudan (çoğunlukla lenfositler ) ve potansiyel olarak tümör dokusundan ekstrakte edilir ve ardından florokromlarla etiketlenir . Genel olarak, tümör DNA'sı floresein (dUTP-FITC olarak) ile yeşil olarak ve rodamin ile kırmızı renkli dokudan elde edilen DNA (dUTP-TR olarak) ile etiketlenir .

Problar daha sonra DNA Cot-1 ile karıştırılır , bu da tekrarlayan DNA dizilerini ortadan kaldırmayı mümkün kılar ve 0.6 ila 3 kb'lik (binlerce baz çifti) fragman üretmeyi mümkün kılan bir polimeraz.

Hibridizasyon

Etiketli DNA karışımı, metafaz kontrol DNA'sı ile karıştırılır . Etiketli DNA daha sonra metafazik DNA ile rekabetçi bir şekilde melezleşecektir :

Tespit etme

Floresans daha sonra bir epifloresan mikroskobu ile tespit edilir ve kantitatif görüntü analizi ile nicelendirilir .

Bu teknik, kromozom düzeyinde DNA kopyalarının sayısındaki kayıpları veya kazançları tespit edebilir . 2006 yılında, kıyaslamalar, tek bir kopyanın kaybını tespit etmek için 5-10 Mb (milyon baz çifti) bölgelerin gerekli olduğu hassasiyetini gösterdi. Öte yandan, 1 Mb'den bir amplifikasyonun algılanması mümkündü.

Teknik hususlar ve sınırlamalar

Başvurular

Ayrıca görün

Dış bağlantılar