UPLC
UPLC ( Ultra Performans Sıvı Kromatografi ) kendi sistemlerinin bazı belirtmektedir Waters Corporation, bir ticari markasıdır yüksek basınçlı sıvı kromatografisi kromatografi .
2004 yılında tanıtılan ve HPLC ile aynı prensipleri kullanan UPLC, HPLC'yi üç alanda iyileştirir: kromatografik çözünürlük, analiz hızı ve hassasiyet.
HPLC'yi neden iyileştirmelisiniz?
Geleneksel HPLC, birçok avantajı olan bir ayırma yöntemidir: sağlamlık, kullanım kolaylığı, iyi bilinen ayırma ilkeleri, iyi hassasiyet ve ayarlanabilir seçicilik. Temel sınırlaması, gaz kromatografisi veya kapiler elektroforeze kıyasla verimlilik eksikliği olarak kalır : bu, sıvı fazdaki düşük difüzyon katsayılarından gelir ve sabit fazda analitlerin yavaş difüzyonunu gösterir. Van Deemter denklemi, daha küçük çaplı partiküllerin kullanılmasıyla verimin arttığını göstermektedir. Ancak bu tür parçacıkların kullanılması, basınç düşüşünde hızlı bir artış anlamına gelirken, çoğu HPLC sistemi yalnızca 400 bara kadar çalışabilir. Bu nedenle, kabul edilebilir bir basınç düşüşünü korurken, verimlilik kaybı olmadan analizleri hızlandırmak için bu geleneksel sistemlerde yaklaşık 2 μm'lik partiküllerle doldurulmuş kısa kolonlar kullanılır.
HPLC ayrımlarının verimliliğini artırmak için iki ilk seçenek mümkündür:
- daha yüksek sıcaklıkta çalışın (daha düşük viskozite ve daha hızlı difüzyon, dolayısıyla daha düşük basınç düşüşü ve daha iyi verimlilik)
- monolitik sütunlar kullanın (basınç düşüşünden dolayı artık sınırlama yok).
Üçüncü bir çözüm, UPLC sistemlerinin kökenindedir.
Prensip
UPLC, <4 um parçacıklardan oluşan sabit bir fazın kullanımına dayanır (oysa HPLC kolonları genellikle 3 ila 5 um parçacıklarla doldurulur). Üç bileşenli bir denklem tarafından yönetilen Van Deemter eğrisi, böyle bir partikül çapı ile iyi bir verimlilik için kullanılabilen akış hızı aralığının, daha büyük çaplardan çok daha geniş olduğunu göstermektedir. Sonuç olarak, kromatografik performansı değiştirmeden verimi ve dolayısıyla analiz hızını artırmak mümkündür. Bununla birlikte, UPLC'nin ortaya çıkışı, ayırma performansından (ölü hacimleri sınırlandırarak) yararlanabilen ve üretilen basınçlarla uyumlu (550 ila 1000 bar arasında) yeni bir sıvı kromatografi sisteminin araçsal olarak geliştirilmesini gerektirdi. HPLC'de 170 ila 400 bar).
Dezavantajları
Öte yandan, basınç artışı daha fazla bakım gerektirir ve bu tip kolonların ömrünü kısaltır. Şimdiye kadar, benzer ve daha iyi performanslar, yüksek basıncın zararlı etkileri olmaksızın yaklaşık 2 µm partikül boyutuna sahip sabit fazlar kullanılarak kanıtlanmıştır. Ek olarak, 2 um'den küçük fazlar genellikle yenilenemez ve bu nedenle sınırlı kullanıma sahiptir.
Notlar ve referanslar
-
Bu denklem, mobil faz lineer hızı u bir fonksiyonu olarak, teorik plaka yüksekliği = H,: . d p sabit faz partikülünün çapı, D m sıvı fazdaki analitlerin difüzyon katsayısı, f (k) tutma faktörünün bir fonksiyonu. Plakanın teorik yüksekliği, verimlilikle ters orantılıdır, maksimum verimlilik arayışı, bu denklem ve ilgili eğrisi ile minimum H'yi bulmak için tutar.
- referans gerekli
