Gram boyama Danimarkalı bakteriyolog adını borçludur Hans Christian Gram Bu mümkün özelliklerini vurgulamak için kılan bir leke 1884 yılında protokolü geliştirdi bakteriyel duvarı ve ayırt ve sınıflandırmak bakteri için bu özellikleri kullanmak için. Avantajı, bir ürün veya ortamda bulunan bakteriler hakkında hem tip hem de formda hızlı, kolay ve ucuz bilgi sağlamasıdır.
Böylelikle bilim adamları, Gram-pozitif bakterileri - aynı zamanda "Gram-pozitif" olarak da bilinir - büyük miktarda peptidoglikan içeren tek bir duvarla , daha az peptidoglikandan oluşan ancak bir zarı olan Gram-negatif bakterilerden, ek bir dış zar ile ayırt edebilirler . Bu tür bir sınıflandırma tıbbi alanda (bakterilerin direnci ve bakteri türüne bağlı olarak antibiyotiklerin etkinliği) sonuçsuz değildir.
Sabit bir lekeye sahip olmayı da gerektirir.
İşte bu renklendirmenin farklı aşamaları:
Adım 1 ve 2, bakteri içeriğini mor renklendirir . Kantaron moru, tüm bakterilerin sitoplazmik bileşenlerine bağlanır. Lugol bu iç rengi düzeltir.
Adım 3 (alkol), " Gram negatif " olduğu söylenecek olan bakterilerin sitoplazmasını renklendirmek için kullanılır . Aslında, bunların peptidoglikan bakımından fakir bir duvarı vardır - bu nedenle daha ince - alkolün ( hidrofilik molekül ) veya alkol-aseton karışımının geçmesine izin verecek ve centiyana menekşesini ortadan kaldırarak sitoplazmanın rengini bozacaktır. Aksine, " Gram-pozitif " olarak adlandırılan bakteriler için duvar, daha büyük bir peptidoglikan "tabakasından" oluştuğu için alkol geçirimsiz bir bariyer oluşturur. Bu nedenle duvar daha kalındır. Bakteriler daha sonra mor renkte kalacaktır.
Aşama 4 a, counterstain vermek amacıyla daha önce renksiz , Gram-negatif bakterilere onları mikroskobu altında görüntülenmiştir sağlayan pembemsi bir renk. Gram pozitif olarak kalan menekşeler bakteriler , sitoplazmalarını emen mordan daha soluk renklere karşı bu duruma açık bir şekilde duyarlı olmayacaklar.
Gram boyama böylece bakteri duvarını ayırt etmeyi ve bakterileri iki büyük gruba ayırmayı mümkün kılar:
Renklendirmedeki bu farklılıklar ve şekil farklılıkları ( basil veya kok ), bakterilerin sınıflandırılmasının kökenindedir.
Not : Bazı bakteriler bu renklendirmeye duyarsız kalır, bu, diğerlerinin yanı sıra Mollicutes veya Eubacteria'nın üç ana sınıfından biri olan Ténéricutes olarak adlandırılan durumdur (Gracilicutes, Firmicutes, Ténéricutes). Aslında, bu bakteriler duvardan yoksundur ve Gram - görünür.
Gram boyama, mikrobiyolojide Gram pozitif veya negatif bakterileri tespit etmek için sıklıkla kullanılır. Bu, farklı mikroorganizma popülasyonlarını ayırt etmeyi ve sınıflandırmayı mümkün kılar. Örneğin, bir biyopside organizmada enfeksiyon şüphesi olduğunda, bu boyama, ardından bir histopatolojik analiz ile tanı koymak için kullanılabilir. Bu yöntem, geleneksel bir kültürden daha hızlı olma avantajına sahiptir.
Tespit edilen bakteriler iki kategoriye ayrılır. Örnek olarak:
Bu yöntemin amacı, bir bakterinin Gram pozitif mi yoksa Gram negatif mi olduğunu, normal boyama adımlarından geçmeden ve mikroskop kullanmadan hızlı bir şekilde doğrulamaktır. İzole edilmiş bir koloni ile % 3 potasyum hidroksit ( KOH ) çözeltisi damlasıyla temas ettirmek (bir mikroskop lamı üzerinde) yeterlidir . Pastör pipeti kullanarak karıştırıyoruz. Birkaç saniye sonra karışımı yukarı doğru çekiyoruz. Pipet ve slayt arasında bir filaman oluşursa, izole edilen koloni Gram negatif bakterilerden oluşur; pipete hiçbir şey girmezse, Gram pozitif bakterilerle uğraşıyoruz. Yöntem, 1977'de Gram boyası için bir kalite kontrol olarak önerildi. Bir değerlendirme sırasında (John Buck, 1982) bu yöntemle 400 deniz bakterisi suşu üzerinde elde edilen sonuçlar Gram boyama ile doğrulandı.