Enzim immunoassay ELISA ( İngiliz enzim bağlantılı immünosorbent testi , kelimenin tam anlamıyla "teknik enzim bağlantılı immünosorbent", yani enzim immün testi katı destek tekniği) bir laboratuar incelemesidir. Bu yöntem esas olarak bir numunede bir antikor veya antijenin varlığını tespit etmek için kullanılır .
Bu biyokimyasal analiz tekniği, spesifik bir antikor (veya tersine bir antijen tarafından incelenen bir antikor) tarafından çalışılan bir antijenin tanınmasının izlendiği immüno-enzimatik saptama tekniklerinin (veya enzim immünoanalizleri için EIA ) daha genel çerçevesine girer. bir enzim tarafından katalize edilen ve miktarı spektroskopi ile tahlil edilen renkli bir bileşen salan bir reaksiyon ile . Bunu yapmak için antijen, bir enzime kovalent olarak bağlanmış bir antikor tarafından tanınır (veya tersine, antikor, etiketli bir antijen tarafından tanınır). Etiketli molekülün bağlanması, antikora bağlı enzim için kromojenik veya florojenik bir substratın kullanılmasından sonra renkli veya floresan bir sinyalin yayılmasına neden olacaktır. Bu teknikler , etiketlemenin, radyolojik aktivitesi saniye başına parçalanma sayısıyla ölçülen bir radyo element tarafından gerçekleştirildiği radyoimünolojik deneylere (veya radyo immünoanalizleri için RIA'ya ) karşı olacaktır . Tekniğin uygulanmasını kolaylaştırmak için, özellikle analiz edilecek çok sayıda örnek olması durumunda, istenen antijene özgü antikor veya istenen antikor tarafından tanınan antijen, bununla kaplanan kullanılan desteğe bağlanır, bu nedenle immünoabsorpsiyon tekniğinin adı. Antijen tanımanın (dolaylı, sandviç veya rekabetçi ELISA) özgüllüğünü veya hassasiyetini artırmayı mümkün kılan çeşitli işletim protokolleri mevcuttur.
ELISA, hem bir antijenin hem de bir numunedeki bir antikorun varlığını değerlendirmek için kullanılabildiğinden, hem serum antikor konsantrasyonlarını ( HIV testi veya HIV testi için olduğu gibi . Nil virüsü ) belirlemek için etkili bir araçtır . bir antijenin varlığını tespit edin. Ayrıca süt , yer fıstığı , ağaç yemişleri ve yumurta gibi gıda alerjenlerini tespit etmek için gıda endüstrisinde uygulamalar bulmuştur . Basit, kullanımı kolay ve ucuz bir testtir. Spesifik antikorun mevcudiyeti ile sınırlıdır.
Antijenin tespitinin hassasiyetini geliştirmek için, istenen antijeni tanıyan antikor bir enzime bağlanmayabilir, ancak kendisi bir enzime bağlanacak olan ikinci bir antikor tarafından spesifik olarak tanınabilir .
Enzim bir güçlendirici görevi görür: Enzime konjuge edilmiş birkaç antikor bağlı olsa bile, enzim birçok sinyalin oluşumunu katalize eder, bu da bu testi çok hassas hale getirir, ancak aynı zamanda yanlış pozitiflerin sayısını da artırır . Bu nedenle, kontrol kuyularının sağlanması mantıksal olarak gereklidir.
Serum antikor konsantrasyonunu belirlemek için en yaygın olarak kullanılan dolaylı ELISA'nın adımları şunlardır:
Sandviç ELISA, bu tekniğin daha az yaygın (klinik) bir varyantıdır ve serumda veya başka herhangi bir örnekte bir antijen örneğini saptamak için kullanılır. Öte yandan bu teknik, araştırmada çok yaygındır.
Süreç, geniş bir çerçevede aşağıdaki şekilde gerçekleşir:
Bununla birlikte, gösterildiği gibi, çoğu zaman, her antijen için enzime konjuge edilmiş antikorların yaratılmasından kaçınmak için tespit antikorlarının eklenmesi gibi ek bir adım vardır . Diğer antikorların Fc parçasını tanıyan bir bağlı enzimin kullanılması, bunun çeşitli durumlarda kullanılmasına izin verir ve prosedürün maliyetini düşürür.
Bu varyant, bağlanma rekabeti ilkesini kullanarak bir antijenin tahliline izin verir:
Bu nedenle, etiketlenmiş antijenler (bilinen miktarda) ile etiketlenmemiş (belirlenecek miktarda) arasında, eksik olan antikorlara bağlanmaları için rekabet vardır. Bu nedenle, tahlil edilecek antijen sayısı ne kadar fazla olursa, antikorlar tarafından tutulan antijenler arasındaki oranları o kadar büyük olur ve sinyal o kadar zayıf olacaktır. Tersine, antijenin başlangıç konsantrasyonu düşükse, sinyal güçlü olacaktır.
ELISA, nicel veya nitel amaçlar için yürütülebilir:
Doğrudan ELISA, çeşitli proteinlerin analizi için kullanılır. Tıbbi farmakolojideki uygulamalardan alınan bazı örnekler: tiroid hormonları, ilaç konsantrasyonu ( uygunluğu değerlendirmek ve / veya dozu ayarlamak için ), vb.
Halk için en iyi bilinen uygulama birinci basamak HIV testidir .
ELISA tekniği, kan serumunda anti- HIV antikorlarının saptanmasına izin verir (bu nedenle "seropozitif" veya "seronegatif terimleri). Teknik oldukça hassastır (çoğu vaka tespit edilir ve" yanlış negatifler "(= hasta olduğunda negatif testler) seropozitif) neredeyse hariç tutulmalıdır, en azından test bulaşıcı temastan sonra üç ay içinde yapılırsa) ve kabul edilebilir bir özgüllük (düşük oranda " yanlış pozitifler " (= antikorun spesifik olmayan bir antijenle reaksiyonu yoluyla pozitif test) Bununla birlikte, pozitif anti-HIV serolojisi durumunda numuneler , elektroforeze dayalı bir teknik kullanan ve hata oranı son derece düşük olan western blot gibi doğrulama testlerine tabi tutulmalıdır .