MNase-Sıra

MNase-Sekans kullanılan bir tekniktir , moleküler biyoloji bölgelerini tanımlamak için kromatin tarafından işgal nükleozomlar boyunca genomu .

Açıklama

Bu teknik, MNase ile sindirimden kaynaklanan parçaların yüksek verimli dizilişine dayanmaktadır . Kromatinin MNase tarafından sindirilmesi, bir veya daha fazla nükleozom tarafından işgal edilen DNA bölgelerinin tanımlanmasını mümkün kılan nispeten basit ve etkili bir yöntemdir . Geçirgenleştirilmiş hücrelerin çekirdekleri, iki değerlikli bir katyon (örneğin Ca2 + ) varlığında MNase'ye maruz bırakıldığında , bu nükleaz, yandaki şekilde gösterildiği gibi nükleozomlar arasında çift sarmallı kesikler yapar. Kromatin substratlarının çok yüksek MNaz konsantrasyonları ile muamelesi, mononükleozomların çoğunu üretir. Jel üzerinde göç ve ardından 146 baz çifti (bp) civarında bir kesim , mononükleozomların büyük bir çoğunluğunun elde edilmesini sağlamayı mümkün kılar. Bu işlemden kaynaklanan fragmanlar daha sonra çeşitli yüksek verimli sıralama protokollerine göre sıralanır.

MNase-Seq veri işleme

MNase-Seq verilerinin temel işlenmesi ChIP-Seq , DNase-Seq ve FAIRE-Seq ile benzerdir , ancak fragmanların gerçek boyutunu yansıtmak için genellikle tam olarak 146 bp'ye gerilir. 73 bp'lik bir okuma kaymasına dayanan diğer yöntemler, nükleozomal orta noktayı veya nükleozomların uçlarını, her iplik için herhangi bir uzama gerçekleştirmeyerek ve her okumanın başlangıç ​​koordinatını kullanarak ( iplik).

İlgili Makaleler

Notlar ve referanslar

  1. (in) RJ Clark ve G. Felsenfeld , "  Structure of Chromatin  " , Nature New Biology , cilt.  229,27 Ocak 1971, s.  101–106 ( DOI  10.1038 / newbio229101a0 , çevrimiçi okuma , 7 Şubat 2016'da erişildi )
  2. R. Axel , "  Stafilokokal nükleaz ile çekirdeklerde DNA ve kromatin bölünmesi  ", Biochemistry , cilt.  14,1 st 1975 Temmuz, s.  2921–2925 ( ISSN  0006-2960 , PMID  1148185 , çevrimiçi okuma , 7 Şubat 2016'da erişildi )
  3. Yong Zhang , Zarmik Moqtaderi , Barbara P. Rattner ve Ghia Euskirchen , "  İçsel histon-DNA etkileşimleri, in vivo nükleozom pozisyonlarının ana belirleyicisi değildir  ", Nature Structural & Molecular Biology , cilt.  16,1 st Ağustos 2009, s.  847–852 ( ISSN  1545-9985 , PMID  19620965 , PMCID  2823114 , DOI  10.1038 / nsmb.1636 , çevrimiçi okuma , 7 Şubat 2016'da erişildi )
  4. Romain Fenouil , Pierre Cauchy , Frederic Koch ve Nicolas Descostes , "  CpG adaları ve GC içeriği, memeli promoterlerde transkripsiyondan bağımsız bir şekilde nükleozom tükenmesini dikte eder  ", Genome Research , cilt.  22,1 st Aralık 2012, s.  2399–2408 ( ISSN  1549-5469 , PMID  23100115 , PMCID  3514669 , DOI  10.1101 / gr.138776.112 , çevrimiçi okuma , 7 Şubat 2016'da erişildi )