Tek alanlı antikorlar

Bir tek alanlı bir antikor ( sdAb gelen, İngilizce  : tek alanlı bir antikor ) olarak da bilinen, nanoantikorlar , bir bir antikor fragmanı , tek oluşan monomerik değişken antikor alanı . Bütün bir antikor gibi, belirli bir antijene seçici olarak bağlanabilir . Sadece 12 ila 15 kDa'lık bir moleküler ağırlığa sahip olan tek alanlı antikorlar, iki ağır protein zinciri ve iki hafif zincirden oluşan ve hatta Fab fragmanlarından (~ 50 kDa) daha küçük olan yaygın antikorlardan ( 150 ila 160  kDa ) çok daha küçüktür. bir hafif zincir ve yarım ağır zincir) ve tek zincirli değişken fragmanlar (~ 25 kDa, iki değişken alan, biri hafif zincirden ve diğeri ağır zincirden).

İlk tek alanlı antikorlar, develerde bulunan ağır zincir antikorlarından tasarlandı  ; bunlara V H H parçaları denir . Kıkırdaklı balıklar da ağır zincir antikorları vardır (IgNAR, İngilizce yeni antijen reseptörü immünoglobülin , "immünoglobulin reseptörü yeni antijenler") olan, tek alanlı bir antikor, adı fragmanları V NAR, elde edilebilir. Alternatif bir yaklaşım, insanlarda veya farelerde yaygın olan immünoglobulin G'nin (IgG) dimerik değişken alanlarını monomerlere bölmektir . Tek alanlı antikor araştırmalarının çoğu halihazırda ağır zincir değişken alanlarına dayansa da, hafif zincirlerden türetilen nanobodilerin de hedef epitoplara spesifik olarak bağlandığı gösterilmiştir .

Camelid tek alanlı antikorların, normal bir antikor kadar spesifik ve bazı durumlarda daha sağlam olduğu gösterilmiştir. Ek olarak, geleneksel antikorlar için kullanılanla aynı faj kaydırma prosedürü kullanılarak kolayca izole edilebilirler ve yüksek konsantrasyonlarda in vitro yetiştirilmelerine olanak tanırlar. Daha küçük boyut ve benzersiz alan, bu antikorların seri üretim için bakteri hücrelerine dönüştürülmesini kolaylaştırır ve bu da onları araştırma amaçları için ideal hale getirir.

Tek alanlı antikorlar, çoklu farmasötik uygulamalar için araştırılmaktadır ve akut koroner sendrom , kanser ve Alzheimer hastalığının tedavisinde kullanılabilir .

Özellikleri

Tek alanlı bir antikor, bir ağır zincir antikorunun veya ortak IgG'nin değişken bir alanını ( VH ) içeren, yaklaşık 110 amino asit uzunluğunda bir peptit zinciridir . Bu peptitler, antijenlere karşı bütün antikorlara benzer bir afiniteye sahiptir, ancak daha fazla ısıya dayanıklıdır ve deterjanlara ve yüksek konsantrasyonlarda üreye karşı stabildir . Camelid antikorları ve balıklardan türetilenler, normalde lipofilik bölgeyi kaplayan genişletilmiş bir döngü (yukarıda turuncu renkli bant temsili) oluşturan bölge 3 tamamlayıcılık belirleme (CDR3 tamamlayıcılık belirleme bölgesi 3 ) nedeniyle daha az lipofiliktir ve suda çözünürdür . bir hafif zincire bağlanır. 1999'da yapılan bir araştırmaya göre , yaygın antikorlardan farklı olarak, altı tek alanlı antikordan ikisi antijenleri bağlama yeteneklerini kaybetmeden 90  ° C (194 ° F) sıcaklığa dayandı.Mide asidi ve proteaz amino asit dizisine bağlıdır. Bazı türlerin oral uygulamadan sonra bağırsakta aktif olduğu gösterilmiştir , ancak bağırsaktan düşük absorpsiyonları, sistemik endikasyonlar için oral olarak uygulanan tek alanlı antikorların gelişimini engeller .

Nispeten düşük molekül ağırlıklı dokularda daha geçirgenlik neden olur ve kısa plazma yarı ömrü, bunlar aracılığıyla ortadan kalktığından böbrekler . Tam antikorların aksine , tamamlayıcı sistem tarafından tetiklenen sitotoksisite göstermezler çünkü bir Fc bölgesi yoktur. Develerden ve balıklardan türetilen sdAb'ler, bütün antikorlar, örneğin enzimlerin aktif bölgelerine erişilemeyen maskelenmiş antijenlere bağlanabilir . Bu özelliğin, bu tür sitelere erişebilen genişletilmiş CDR3 döngüsünden kaynaklandığı gösterilmiştir.

Üretim

Ağır zincir antikorlarından

Tek alanlı bir antikor, tek dromedarların , develerin , lamaların , alpakaların veya köpek balıklarının müteakip izolasyon istenen antijen ve ağır zincir antikorunu kodlayan RNA m ile immünize edilmesiyle elde edilebilir. Bir kullanma PCR uzatma takımını ve Öz ligasyonu göre kütüphane oluşturma yöntemi ( "şövalesi" olarak adlandırılır), Mitchell Ho ve Martin Flajnik büyük V kurulan NAR, antikor kütüphanesi 1.2 x 10 arası bir boyuta sahip , 10 saf hemşire köpekbalığı den. Faj gösterimi ve ribozom gösterimi gibi tarama teknikleri, antijen bağlayıcı klonların tanımlanmasına yardımcı olur.

Geleneksel antikorlardan

Alternatif olarak, tek alanlı antikorlar, ortak fare tavşanı veya insan dört zincirli IgG'den yapılabilir . İşlem benzerdir, bağışık veya saf donörlerden gen kitaplıkları ve en spesifik antijenlerin tanımlanması için görüntüleme teknikleri içerir. Bu yaklaşımla ilgili bir problem, ortak IgG bağlanma bölgesinin, lipofiliklikleri nedeniyle dimerize olma veya kümelenme eğilimi gösteren iki alandan ( VH ve VL ) oluşmasıdır. Monomerizasyon genellikle lipofilik amino asitlerin hidrofilik amino asitlerle değiştirilmesiyle gerçekleştirilir, ancak çoğu zaman antijen için afinite kaybıyla sonuçlanır. Afinite korunabilirse, tek alanlı antikorlar ayrıca E. coli , S. cerevisiae veya diğer organizmalarda da üretilebilir .

Tek alanlı insan antikorlarından

Mitchell, Ho ve Dimiter Dimitrov Ulusal Kanser Enstitüsü , bir gelen mezotelin, Gpc2'yi ve GPC3 de dahil olmak üzere çeşitli tümör antijenlerini hedef insan tek alanlı antikorlar izole tasarlanmıştır, insan V H alanı faj görüntüleme kitaplığı . İnsan tek alanlı antikorlar, kanser tedavisi için immünotoksinler (HN3-PE38, HN3-mPE24, HN3-T20) ve T hücresi reseptör kimerik antijeni (CAR kimerik antijen reseptörü ) oluşturmak için kullanıldı. İnsan tek alanlı antikor HN3 tarafından GPC3 üzerinde Wnt bağlanma alanının bloke edilmesi, karaciğer kanseri hücrelerinde Wnt aktivasyonunu inhibe eder.

Potansiyel uygulamalar

Tek alanlı antikorlar, küçük boyutları, basit üretimleri ve yüksek afiniteleri nedeniyle biyoteknik ve terapötik alanlarda çok çeşitli uygulamalar bulmaktadır.

Biyoteknoloji ve teşhis

Bir floresan proteinin bir nanobody ile füzyonu, kromobody olarak bilinen şeyi üretir. Kromodiler, canlı hücrelerin farklı organellerinde hedefleri tanımak ve izlemek için kullanılabilir . Bu nedenle, canlı hücrelerin mikroskopi olasılıklarını artırabilirler ve yeni fonksiyonel çalışmalara izin verirler. Bir anti- GFP nanobody'nin GFP- nanotrap adı verilen tek değerlikli bir matrise bağlanması , yeni biyokimyasal analizler için GFP füzyon proteinlerinin ve bunların etkileşim ortaklarının izolasyonuna izin verir. Tek bir molekülün süper çözünürlüklü görüntüleme teknikleriyle lokalizasyonu, hedef proteine ​​yakın bir yerde floroforların spesifik olarak verilmesini gerektirir . Büyük boyutları nedeniyle, organik boyalara bağlı antikorların kullanımı, florofor ile hedef protein arasındaki mesafeden dolayı sıklıkla yanıltıcı bir sinyale yol açabilir. Organik boyaların GFP etiketli proteinleri hedefleyen anti-GFP nanoborileriyle füzyonu, küçük boyut ve yüksek afinite nedeniyle nano ölçekli uzaysal çözünürlüğe ve minimum bağlanma hatasına izin verir. Nanobodilerin boyut fraksiyonu, korelatif ışık elektron mikroskobu çalışmasına da fayda sağlar. Herhangi bir geçirgenleştirici ajan olmadan, kimyasal olarak sabitlenmiş hücrelerin sitoplazması, florofor etiketli nanobodiler için kolayca erişilebilirdir. Küçük boyutları, hacimsel numunelere sıradan antikorlardan daha derine nüfuz etmelerine de izin verir. Floresans mikroskobu ve ardından elektron mikroskobu ile incelenen dokularda yüksek yapısal kalite korunur. Bu, hem moleküler etiketleme hem de elektron mikroskobik görüntüleme gerektiren sinirbilim araştırmaları için özellikle yararlıdır.

Tanısal biyosensör uygulamalarında , nanobodiler ileriye dönük olarak bir araç olarak kullanılabilir. Küçük boyutları nedeniyle, biyosensörlerin yüzeylerine daha yoğun bir şekilde bağlanabilirler. Daha az erişilebilir epitopları hedeflemedeki avantajlarına ek olarak, konformasyonel stabiliteleri ayrıca yüzey rejenerasyon koşullarına karşı daha yüksek direnç sağlar. Sensör yüzeylerinde tek alanlı antikorların hareketsizleştirilmesinden sonra, insan prostata özgü antijenin (hPSA) tespiti test edildi. Nanoborlar, klinik olarak önemli hPSA konsantrasyonlarını tespit etmede geleneksel antikorlardan daha iyi performans gösterdi.

Bir hedef molekülün kristalleşme olasılığını artırmak için , nanobodiler kristalleşme şaperonları olarak kullanılabilir . Yardımcı proteinler olarak, konformasyonel durumların sadece bir alt kümesini bağlayarak ve stabilize ederek konformasyonel heterojenliği azaltabilirler. Kristal temasları oluşturan bölgeleri genişletirken kristalleşmeye müdahale eden yüzeyleri de maskeleyebilirler.

Terapötik

Tek alanlı antikorlar, çeşitli hedeflere karşı yeni bir terapötik araç olarak test edilmiştir. İnfluenza A alt tipi H5N1 ile enfekte edilmiş farelerde , hemaglutinine yönelik nanobodiler , in vivo H5N1 virüs replikasyonunu bastırmış ve morbidite ve mortaliteyi azaltmıştır. Nanokorlar hücresel reseptörüne bağlanma alanını hedefleyen ortaya konmuştur hastalık oluşturma faktörleri arasında, toksin A ve toksin B , Clostridium difficile ile hücrelerin patolojik etkilerini nötralize fibroblastlar , in vitro . Antijen sunan hücreleri tanıyan nanobody konjugatları, güçlü bir bağışıklık tepkisi oluşturmak için tümör tespiti veya antijenlerin hedefli verilmesi için başarıyla kullanılmıştır.

Domuz yavrularında E. coli'nin neden olduğu ishale karşı oral yoldan uygulanan tek alanlı antikorlar geliştirilmiş ve başarıyla test edilmiştir. Enflamatuar barsak hastalığı ve kolon kanseri gibi gastrointestinal sistemin diğer hastalıkları da oral yoldan uygulanan tek alanlı antikorlar için olası hedeflerdir.

Malassezia furfur'un bir yüzey proteinini hedefleyen deterjana dayanıklı türler, kepek önleyici şampuanlarda kullanılmak üzere tasarlanmıştır .

Fototermal terapi için bir yaklaşım olarak meme ve yumurtalık kanseri hücrelerinde aşırı eksprese edilen HER2 antijenine bağlanan nanobodiler , dallı altın nanopartiküllere konjuge edildi (şekle bakınız). Tümör hücreleri, bir test ortamında bir lazer kullanılarak fototermal olarak imha edildi.

Von Willebrand faktörünü hedefleyen tek alanlı bir antikor olan caplacizumab , akut koroner sendromlu hastalarda trombozun önlenmesine yönelik klinik çalışmaların konusudur . Yüksek riskli perkütan koroner müdahalede ALX-0081'i inceleyen bir faz II çalışması Eylül 2009'da başladı.

Ablynx , nanobodilerinin kan-beyin bariyerini geçebileceğini ve büyük katı tümörlere tam antikorlardan daha kolay girebileceğini ve bu da beyin kanserine karşı ilaçların geliştirilmesine izin vereceğini tahmin ediyor .

COVID-19 hastalığına neden olan SARS-Cov-2 koronavirüs ile mücadelede nanobodiler olası bir tedavi olarak değerlendiriliyor. Normal boyutlu bir antikor, yalnızca bu koronavirüsü kaplayan proteinlerin dikenlerinin uçlarına yapışabilir. Nancorps boyutları sayesinde, dikenler arasındaki ceplere ve yarıklara dalarak virüsün yerleştirmiş olabileceği olası savunmaları aşabilecek. Bu yaklaşım ve antikorları içeren diğerleri covid-19'a karşı değerlendirilmektedir.

Notlar ve referanslar

  1. "  Camelid tek alanlı antikor fragmanlarının özellikleri, üretimi ve uygulamaları  ", Applied Microbiology and Biotechnology , cilt.  77, n o  1,Kasım 2007, s.  13–22 ( PMID  17704915 , PMCID  2039825 , DOI  10.1007 / s00253-007-1142-2 )
  2. (in) İngilizce, Hong ve Ho, "  Antik türler çağdaş terapötikler sunar: köpekbalığı VNAR tek alanlı antikor dizileri, faj kitaplıkları ve potansiyel klinik uygulamalar hakkında bir güncelleme  " , Antibody Therapeutics , cilt.  3, n o  1,2020, s.  1–9 ( PMID  32118195 , PMCID  7034638 , DOI  10.1093 / abt / tbaa001 )
  3. "  Çok işlevli (Mf1) etki alanına nanobodiler tarafından interferon düzenleyici faktör-1'in hücre içi aktivasyonu  ", The Journal of Biological Chemistry , cilt.  285, n o  49,Aralık 2010, s.  38348–61 ( PMID  20817723 , PMCID  2992268 , DOI  10.1074 / jbc.M110.149476 )
  4. "  Bakla benekli virüsü için yüksek afiniteye sahip devetüyü nanobodileri: virüslere karşı bitki direncini immünomodüle etmek için olası bir umut verici araç  ", Plant Molecular Biology , cilt.  87, no .  4–5,Mart 2015, s.  355–69 ( PMID  25648551 , DOI  10.1007 / s11103-015-0282-5 )
  5. (in) "  Nanobody kanser tedavisinde yeni bir çağı müjdeliyor  " ,12 Mayıs 2004
  6. (in) "  Pipeline  " Ablynx ( 20 Ocak 2010'da erişildi )
  7. (in) "  Şampuanda faj gösterimi ile kepek önlenmesi için lama antikor fragmanlarının izolasyonu  " , Applied and Environmental Microbiology , Cilt.  71, n o  1,2005, s.  442–50 ( PMID  15640220 , PMCID  544197 , DOI  10.1128 / AEM.71.1.442-450.2005 )
  8. (inç) "  Lizozim ile kompleks içinde bir köpekbalığı tek alanlı antikor V alanının kristal yapısı  " , Science , cilt.  305, n o  5691,Eylül 2004, s.  1770–3 ( PMID  15319492 , DOI  10.1126 / science.1101148 , Bibcode  2004Sci ... 305.1770S )
  9. "  Lama VHH antikor fragmanlarının ve fare monoklonal antikorlarının fiziksel kimyasal özelliklerinin karşılaştırılması  ", Biochimica ve Biophysica Açta , cilt.  1431, n o  1,Nisan 1999, s.  37–46 ( PMID  10209277 , DOI  10.1016 / S0167-4838 (99) 00030-8 )
  10. "  Escherichia coli F4 fimbriae spesifik lama tek alanlı antikor fragmanları, in vitro bakteriyel yapışmayı etkili bir şekilde inhibe eder ancak ishale karşı zayıf bir koruma sağlar  ", Veterinary Microbiology , cilt.  111, n kemik  1-2,Kasım 2005, s.  89–98 ( PMID  16221532 , DOI  10.1016 / j.vetmic.2005.09.005 )
  11. "  Oral immünoterapi için proteolitik olarak stabil lama tek alanlı antikor fragmanlarının seçimi ve optimizasyonu  ", Applied Microbiology and Biotechnology , cilt.  72, n o  3,Eylül 2006, s.  544–51 ( PMID  16450109 , DOI  10.1007 / s00253-005-0300-7 , çevrimiçi okuyun )
  12. "  Camelid tek alanlı antikor fragmanlarının özellikleri, üretimi ve uygulamaları  ", Applied Microbiology and Biotechnology , cilt.  77, n o  1,2007, s.  13–22 ( PMID  17704915 , PMCID  2039825 , DOI  10.1007 / s00253-007-1142-2 )
  13. "  Açılış Başyazısı: Sihirli Mermi Aranıyor  ", Antikor Terapötikleri , cilt.  1, n o  1,Haziran 2018, s.  1–5 ( PMID  30101214 , PMCID  6086361 , DOI  10.1093 / abt / tby001 )
  14. "  Lizozim ile kompleks içinde bir köpekbalığı tek alanlı antikor V bölgesinin kristal yapısı  ", Science , cilt.  305, n o  5691,Eylül 2004, s.  1770–3 ( PMID  15319492 , DOI  10.1126 / science.1101148 , Bibcode  2004Sci ... 305.1770S )
  15. "  Lizozim ile kompleks içinde bir deve tek alanlı VH antikor fragmanının kristal yapısı  ", Nature Structural Biology , cilt.  3, n o  9,Eylül 1996, s.  803–11 ( PMID  8784355 , DOI  10.1038 / nsb0996-803 )
  16. (inç) "  Deve ağır zincir antikorlarından tek alanlı antikor fragmanlarının seçimi ve tanımlanması  " , FEBS Letters , cilt.  414, n o  3,Eylül 1997, s.  521–6 ( PMID  9323027 , DOI  10.1016 / S0014-5793 (97) 01062-4 )
  17. (in) "  Altı saf hemşire köpekbalığından NAR tek alanlı antikor kitaplığı  " , Antibody Therapeutics , cilt.  2, n o  1,Ocak 2019, s.  1–11 ( PMID  30627698 , PMCID  6312525 , DOI  10.1093 / abt / tby011 )
  18. (in) Ward Güssow, Griffiths ve Jones, "  Escherichia coli'den salgılanan immünoglobulin tek değişkenli alanların bir repertuarının bağlanma aktiviteleri  " , Nature , cilt.  341, n o  6242,12 Ekim 1989, s.  544–546 ( ISSN  0028-0836 , PMID  2677748 , DOI  10.1038 / 341544a0 , Bibcode  1989Natur.341..544W )
  19. (in) Feng, Wang Hong ve Dower, "  B7-H3 proteinine tavşan tek alanlı antikorlarının bağışıklama ve faj gösterimi yoluyla izolasyonu  " , Antibody Therapeutics , cilt.  3, n o  1,2020, s.  10-17 ( ISSN  2516-4236 , PMID  32166218 , PMCID  7052794 , DOI  10.1093 / abt / tbaa002 )
  20. (in) "  Alan antikorları: tedavi için proteinler  " , Trends in Biotechnology , Cilt.  21, n o  11,Kasım 2003, s.  484–90 ( PMID  14573361 , DOI  10.1016 / j.tibtech.2003.08.007 )
  21. (in) "  Doğanın Ötesinde Antikor Evrimi  " , Nature Biotechnology , Cilt.  20, n o  12,2002, s.  1189–90 ( PMID  12454662 , DOI  10.1038 / nbt1202-1189 )
  22. (in) "  Bir insan tek alanlı antikoru, kanser hücresi alanına yakın bir mezotelinde bir epitopu hedefleyerek güçlü antitümör aktivitesi ortaya çıkarır  " , Molecular Cancer Therapeutics , Cilt.  12, n, o  , 4,Nisan 2013, s.  416–26 ( PMID  23371858 , PMCID  3624043 , DOI  10.1158 / 1535-7163.MCT-12-0731 )
  23. (in) "  Nöroblastoma ve İmmünotoksinlerde tek alanlı antikor bazlı kimerik antijen reseptörleri aracılığıyla glipikan-2'yi terapötik olarak hedefleme  " , Amerika Birleşik Devletleri Ulusal Bilimler Akademisi Bildirileri , cilt.  114, n o  32,Ağustos 2017, E6623 - E6631 ( PMID  28739923 , PMCID  5559039 , DOI  10.1073 / pnas.1706055114 )
  24. (in) "  Hepatoselüler karsinomda konformasyona özgü tek alanlı bir antikor yoluyla glipikan-3'ü terapötik olarak hedefleme  " , Amerika Birleşik Devletleri Ulusal Bilimler Akademisi Bildirileri , cilt.  110, n o  12,Mart 2013, E1083-91 ( PMID  23471984 , PMCID  3607002 , DOI  10.1073 / pnas.1217868110 , Bibcode  2013PNAS..110E1083F )
  25. (in) "  glypican-3 karaciğer kanserini hedefleyen immünotoksin, Wnt sinyallemesinin ve protein sentezinin ikili inhibisyonu yoluyla geriledi  " , Nature Communications , Cilt.  6,Mart 2015, s.  6536 ( PMID  25758784 , PMCID  4357278 , DOI  10.1038 / ncomms7536 , Bibcode  2015NatCo ... 6.6536G )
  26. (in) "  Etki alanına dayalı bir yapı iskelesine sahip geniş bir faj gösterimli insan antikor kitaplığının yapımı, yeni APPROBATION son derece çözünür, kararlı, ağır zincir değişken etki alanıydı  " , Journal of Molecular Biology , cilt.  382, n o  3,2008, s.  779–89 ( PMID  18687338 , PMCID  2551765 , DOI  10.1016 / j.jmb.2008.07.054 )
  27. (in) "  Karaciğer kanseri tedavisi için glipican-3'ü hedefleyen bir immünotoksin, HN3-mPE24 yapımı  " , Oncotarget , cilt.  8, n o  20,Mayıs 2017, s.  32450–32460 ( PMID  27419635 , PMCID  5464801 , DOI  10.18632 / oncotarget.10592 )
  28. (in) "  Tasarlanmış anti-GPC3 immünotoksini, HN3-ABD-T20, Uzun süreli serum retansiyonu yoluyla fare karaciğer kanseri ksenograftlarında gerileme üretir  " , Hepatology , Cilt.  71, n o  5,eylül 2019, s.  1696–1711 ( PMID  31520528 , PMCID  7069773 , DOI  10.1002 / hep.30949 )
  29. Trinh, Wu, Chang ve Ho, "  Özet 2316: Hepatoselüler karsinom için yeni bir terapötik tedavi olarak Sorafenib ile kombinasyon halinde GPC3'e özgü kimerik antijen reseptörü T hücresi  ", Immunology , American Association for Cancer Research,Temmuz 15, 2016, s.  2316 ( DOI  10.1158 / 1538-7445.AM2016-2316 )
  30. (in) "  Glypican'da Kıvrımlı Benzeri Sistein Açısından Zengin Alan Wnt-3 Bağlanmasını ve Hepatoselüler Karsinomu Farelerde Tümör Büyümesini Düzenliyor  " , Hepatology , Cilt.  70, n o  4,ekim 2019, s.  1231–1245 ( PMID  30963603 , PMCID  6783318 , DOI  10.1002 / hep.30646 )
  31. (inç) "  Nanobody: doğal tek alanlı antikorlar  " , Yıllık Biyokimya İncelemesi , cilt.  82,2013, s.  775–97. ( PMID  23495938 , DOI  10.1146 / annurev-biochem-063011-092449 )
  32. (in) "  seçici bir inhibitörü nanobody seviye G proteini G-protein kenetli reseptör sinyallemesini Hedefleme  " , Nature İletişim , Cilt.  9, n o  1,Mayıs 2018, s.  1996 ( PMID  29777099 , PMCID  5959942 , DOI  10.1038 / s41467-018-04432-0 , Bibcode  2018NatCo ... 9.1996G )
  33. (inç) "  Floresan nanobodilerle canlı hücrelerdeki antijenleri hedefleme ve izleme  " , Nature Methods , cilt.  3, n o  11,Kasım 2006, s.  887–9 ( PMID  17060912 , DOI  10.1038 / nmeth953 )
  34. (inç) "  Floresan füzyon proteinleri ile biyokimyasal ve fonksiyonel çalışmalar için çok yönlü bir nanotrap  " , Molecular & Cellular Proteomics , cilt.  7, n o  2Şubat 2008, s.  282–9 ( PMID  17951627 , DOI  10.1074 / mcp.M700342-MCP200 )
  35. (inç) "  Nanobodiler aracılığıyla GFP tabanlı süper çözünürlüklü mikroskopi için basit, çok yönlü bir yöntem  " , Nature Methods , cilt.  9, n o  6,Haziran 2012, s.  582–4 ( PMID  22543348 , DOI  10.1038 / nmeth.1991 )
  36. "  Bağıntılı ışık ve elektron mikroskobu için ince yapının korunması için nanobody immün boyama  ", Nature Methods , cilt.  15, n o  12,Aralık 2018, s.  1029–1032 ( PMID  30397326 , PMCID  6405223 , DOI  10.1038 / s41592-018-0177-x )
  37. (in) "  İnsan prostat spesifik antijen algılaması için deve tek alanlı antikorları ve immobilizasyon kimyası mühendisliği  " , Analytical Chemistry , Cilt.  77, n o  23,Aralık 2005, s.  7547–55 ( PMID  16316161 , DOI  10.1021 / ac051092j )
  38. (in) "  Rekombinant kristalizasyon şaperonlarının mühendisliği  " , Yapısal Biyolojide Güncel Görüş , Cilt.  19, n o  4,Ağustos 2009, s.  449–57 ( PMID  19477632 , PMCID  2736338 , DOI  10.1016 / j.sbi.2009.04.008 )
  39. (in) "  in vitro nötralize edici aktiviteye sahip nanobodiler, fareleri H5N1 influenza virüsü enfeksiyonuna karşı korur  " , The Journal of Infectious Diseases , cilt.  203, n o  8,Nisan 2011, s.  1063–72 ( PMID  21450996 , DOI  10.1093 / infdis / jiq168 )
  40. (in) "  Clostridium difficile toksin A'nın hücre reseptör bağlanma alanını hedefleyen tek alanlı antikorlarla nötralizasyonu  " , The Journal of Biological Chemistry , cilt.  286, n o  11,2011, s.  8961–76. ( PMID  21216961 , PMCID  3058971 , DOI  10.1074 / jbc.M110.198754 )
  41. "  Yapısal Olarak Tanımlanmış αMHC-II Nanobody-İlaç Konjugatları: B Hücresi Lenfoma için Terapötik ve Görüntüleme Sistemi  ", Angewandte Chemie , cilt.  55, n o  7,Şubat 2016, s.  2416–20 ( PMID  26840214 , PMCID  4820396 , DOI  10.1002 / anie.201509432 )
  42. (inç) "  Yıla göre hedeflenen antijen teslimi anti-MHC sınıf II HHV, Odaklanmış αMUC1 (Tn) bağışıklığını ortaya çıkarır  " , kimya bilimi , cilt.  8, n o  8,Ağustos 2017, s.  5591–5597 ( PMID  28970938 , PMCID  5618788 , DOI  10.1039 / c7sc00446j )
  43. (in) "  Oral immünoterapi için proteolitik olarak kararlı lama tek alanlı antikor fragmanlarının seçimi ve optimizasyonu  " , Applied Microbiology and Biotechnology , Cilt.  72, n o  3,Eylül 2006, s.  544–51 ( PMID  16450109 , DOI  10.1007 / s00253-005-0300-7 , çevrimiçi okuyun )
  44. (in) "  Nanobody  " , Nanobody.org,2006
  45. "  Şampuanda faj gösterimi ile kepek önlenmesi için lama antikor fragmanlarının izolasyonu  ", Applied and Environmental Microbiology , cilt.  71, n o  1,Ocak 2005, s.  442–50 ( PMID  15640220 , PMCID  544197 , DOI  10.1128 / AEM.71.1.442-450.2005 )
  46. "  Fototermal terapi için nanobody konjuge dallı altın nanopartiküller ile spesifik hücre hedefleme  ", ACS Nano , cilt.  5, n o  6,Haziran 2011, s.  4319–28 ( PMID  21609027 , DOI  10.1021 / nn1023363 )
  47. (in) "  Ablynx , ALX- 0081 (ANTI-VWF) İlk Nanobody Faz I Çalışmasının Ara Sonuçlarını Açıkladı  " , Bio-Medicine.org,2 Temmuz 2007
  48. "  Nanobodies  " , www.nanobody.org ,2006
  49. (in) Liam Mannix'e , "  Pace bir tedavi Covid-19 için yeni bir umut sağlayın  " üzerine www.theage.com.au Yaş ,10 Ağu 2020(erişim tarihi 23 Ağustos 2020 )