Cyanotoxins olan metabolitleri tarafından sentezlenen Siyanobakterinin .
Kimyasal yapılarına göre üç sınıfa ayrılabilirler: 1) siklik peptidler , 2) alkaloidler ve 3) lipopolisakkaridler .
Bunları toksisite mekanizmalarına göre ayırt etmek de mümkündür : a) hepatik toksinler , b) nöro toksinler ve c) dermato toksinler .
Mikrokistinlerin genel moleküler yapısı
Nodularinlerin genel moleküler yapısı
Toksoidlerin genel moleküler yapısı
Saksitoksinlerin genel moleküler yapısı
Silindirrospermopsinlerin genel moleküler yapısı (Nörotoksin değil, sitotoksindir)
E. coli O111'in bir endotoksininin genel moleküler yapısı: B4 (Hep) L-gliserol-D-manno-heptoz; (Gal) galaktoz; (Glc) glikoz; (KDO) 2-keto-3-deoksioktonik asit; (NGa) N-asetil-galaktozamin; (NGc) N-asetil-glukozamin.
Aplysiatoxin moleküler yapısı
Debromoaplysiatoxin'in moleküler yapısı
Lyngbiatoxin moleküler yapısı
Domoik asidin moleküler yapısı
Okadaik asidin moleküler yapısı
Dermatotoksinler yalnızca tuzlu deniz ortamında bilinirken, LPS tüm siyanobakterilerin hücre duvarının bileşenleridir .
Siyanotoksinlerle temas etmek için çeşitli maruz kalma yolları mümkündür. Ana yollar, kirli suyun alınması ve aynı suyla birincil temastır. Aerosol formundaki toksinlerin solunması ve biyolojik olarak bir toksin biriktirmiş bir organizmanın tüketimi, diğer iki makul maruz kalma kaynağıdır.
Toksikolojik çalışmalar, çeşitli siyanotoksinlerin çeşitli organizmalar (esas olarak fareler) üzerinde ve çeşitli maruziyet yollarına göre akut, kronik, kanserojen ve teratojenik etkilerini belirlemiştir.
Aşağıdaki tabloda, LD 50 değerleri ile intraperitoneal enjeksiyon ile elde edilen farelerde,.
Siyanotoksin | LD 50 (ug / kg) |
---|---|
Mikrokistin-LR | 50 |
Mikrokistin-LA | 50 |
Mikrokistin-YR | 70 |
Mikrokistin-RR | 600 |
(D-Asp3) mikrokistin-LR | 50 ila 300 |
(D-Asp3) mikrokistin-RR | 250 |
(Dha7) mikrokistin-LR | 250 |
(6Z-Adda) mikrokistin-LR | > 1200 |
Nodularin | 50 |
Cylindrospermopsin (saf) | 2000 |
Anatoxin-a ve homoanatoxin-a | 200 ila 250 |
Anatoxin-a (S) | 20 |
Saksitoksin | 10 |
Karşılaştırma için, farelerde akut gavaj toksisitesi mikrokistin-LR, nodularinler, silindirindrospermopsinler ve anatoksin-a için 5 ile 10 mg / kg vücut ağırlığı arasındadır . Saksitoksin (STX) tipik olarak farelerde 260 ug / kg civarında daha düşük değerler sergiler .
Farelerde Aşağıdaki tabloda sunar subkronik toksisite değerleri NOAEL “Gözlemlenen ters etki seviyesi” dir.
Siyanotoksin | NOAEL (ug / kg gün) |
---|---|
Mikrokistin-LR | 40 (fare, gavaj, 13 hafta) |
Silindrospermopsin | 30 (fare, gavaj, 11 hafta) |
toksoid-a | 98 (fare, gavaj, 28 gün) |
Aynı siyanotoksin için toksisite testleri, hepsi aynı koşullar altında gerçekleştirilmediğinden (temas yöntemleri, test edilen organizmalar, saf ekstraktlara karşı alg ekstraktları) gerçekleştirilmediğinden, bir perspektife oturtmak zordur . İkinci durumda, sadece siyanotoksinlerin varlığından farklı olarak, incelenen organizma ile alg kökenli tüm metabolitler arasında sinerjik ve / veya antagonistik etkiler olabilir. Bu nedenle sonuçları yorumlarken dikkatli olmalıyız.
Toksikolojik çalışmalardan ortaya çıkan standartlar içme suyuna ve suyla temas içeren faaliyetlere uygulanır. Duruma bağlı olarak, eşik konsantrasyonlarını siyanotoksinlerin veya siyanobakterilerin türüne göre ayırt ederler, bunun ötesinde durumu düzeltmek için önlemlerin ve / veya eylemlerin alınması gerekir. Siyanotoksinlere uygulanan değerler " toplam siyanotoksinleri ", yani serbest formda olanları (suda çözünmüş) ve hücrelerin içinde bulunanları dikkate alır. Μg / L cinsinden ifade edilirler. Aşağıdaki tablo şu anda yürürlükte olan standartları ve çeşitli ülkelerde sunulanları göstermektedir.
Siyanotoksin | Ülke / kuruluş | Değerler (ug / L) |
---|---|---|
Mikrokistinler | Fransa | 1.0 |
Mikrokistinler | Kanada | 1.5 |
Mikrokistinler | DSÖ | 1.0 |
Mikrokistinler | Brezilya | 1.0 |
Mikrokistinler | Avustralya | 1.3 * |
Mikrokistinler | Yeni Zelanda | 1.0 ve 0.1 ** |
Nodularinler # | Yeni Zelanda | 1.0 |
Anatoxin-a # | Yeni Zelanda | 3.0 |
Anatoxin-a (S) # | Yeni Zelanda | 1.0 |
Silindrospermopsin # | Avustralya | 1.0 |
Silindrospermopsin # | Yeni Zelanda | 3.0 |
Saksitoksinler # | Brezilya | 3.0 |
Saksitoksinler # | Avustralya | % 3.0 ** |
Saksitoksinler # | Yeni Zelanda | 1.0 |
# Önerilen veya önerilen değerler
* Tüm mikrokistinlerin toksisitesini
hesaba katan değer ** Tümör geliştirme etkisini hesaba katan
değer *** µg STX-eşdeğeri / L cinsinden değer
Maksimum tolere edilebilir siyanobakteri konsantrasyonu için kullanılan değerler hücre / mL cinsinden ifade edilir. İçme suyunda ve rekreasyon amaçlı kullanılan kirli suda maksimum tolere edilebilir konsantrasyon için ve birincil temasın meydana geldiği mevcut standartlar sırasıyla 2.000 hücre / mL ve 20.000 hücre / mL'dir . Toksinlerin 0.2 pigogram 2000 bir değeri içeren ortalama bir hücre olarak hücre / mL'ye karşılık gelir 0.4 ug / L , toplam toksin ve 20.000 değerinde hücre / mL'ye karşılık için 4 ug / l toplam toksin. Bu değerler (hücre / mL) ortalamalardır ve yalnızca su hacmindeki tüm siyanobakteriler siyanotoksin üreticileri ise geçerlidir.
Analitik yöntemler, genellikle çok hassas olan ancak çok seçici olmayan ve çok seçici olmayan ve kayda değer hassasiyet sergileyen tarama yöntemlerine ayrılabilir.
Tarama yöntemleri arasında, çeşitli organizmalar üzerinde biyoanalizler , immünolojik yöntem ELISA (Enzim bağlantılı immünosorbent testi) ve siyanotoksinlerin biyokimyasal özelliklerini kullanan çeşitli enzimatik yöntemler buluyoruz.
Doğrulama yöntemleri temel olarak , farklı saptama yöntemleriyle birleştirilmiş yüksek performanslı sıvı kromatografisinin varyantlarıdır; bunlardan en verimli olanı , kendisi çok sayıda analiz cihazı türü sunan kütle spektrometresidir .
Analitik yöntemlerin önündeki en büyük engel numune hazırlamadır. Aslında, preparatın sadece hücre içi toksinleri çıkarmak için hücre lizizini gerektirdiği biyoanalizler haricinde, enterferans yaratabilen ve / veya ilgili molekülleri önceden konsantre edebilen birkaç maddeden kurtulmak genellikle gereklidir.
Lyse ve ekstraksiyonSiyanotoksinler sıvı matris içinde çözülür veya hücrelerin içinde hapsolur. Toksinleri içeren matrise göre numuneleri ayırmak gerekli değilse faydalıdır. Tarafından , süzme ve santrifüj , katı fraksiyonları ayırmak mümkündür, bu hücreler demek ki siyanobakterilerin sıvı kısmını oluşturan, sulu matrisinden.
Katı fraksiyonu parçalamak için dondurma-çözme, liyofilizasyon ve sonikasyon (ultrasonikasyon olarak da adlandırılır) gibi farklı teknikler kullanılır . Diğer protokoller, örneğin kaynayan bir çözücü içinde ekstraksiyon ve bir Soxhlet tipi ekstraksiyon gerçekleştirmeyi mümkün kılan bir mikrodalga kullanımı gibi eşzamanlı bir liziz / ekstraksiyon prosedürünü kullanır . Basınçlı yüksek sıcaklıkta sıvı ekstraksiyonunun kullanımı da kullanılır.
Tüm siyanotoksinlerin ekstraksiyonu için hiçbir çözücü evrensel değildir, çünkü moleküler yapıları değişken bir hidrofobik veya polar karaktere sahiptir . Ek olarak, özütleme çözeltisinin pH'ı , şu an için çok az anlaşılan, ancak vakaların çoğunda bulunan iyonlaşabilir gruplar göz önüne alındığında, bileşiklerin çözünürlüğünü büyük olasılıkla etkileyen bir parametredir .
Aşağıdaki tablo, başlıca siyanotoksin sınıflarını çıkarmak için en yaygın olarak kullanılan çözücüleri göstermektedir. Mikrosistinler dışında, diğer çözücüler valide edilmemiştir ve teklif konusudur. Mikrokistinleri ekstrakte etme koşulları, muhtemelen mikrokistinlerin yapısal analogları olan nodularinler için geçerlidir.
Siyanotoksin | Çözücü |
---|---|
Mikrokistinler | Su: metanol (% 50 ile% 75 arasında) |
Toksoidler | Hafif asitlenmiş su veya su: metanol |
Silindrospermopsinler | % 25 metanol veya % 5 asetik asit çözeltisi (pH = 3) |
Saksitoksinler | Su: metanol ** |
Ekstraksiyonun doğasında olan bir problem, çabucak karmaşık hale gelen bir numunenin oluşturulmasına müdahale etmenin birlikte ekstraksiyonudur. Ek olarak, genellikle sulu olan sıvı fraksiyonlar, çok düşük konsantrasyonda çözünmüş siyanotoksinlere sahiptir. Bu nedenle, analiz aparatının niceleme sınırlarını aşmak için nicelendirmeden veya konsantre etmeden önce ilgilenilen molekülleri saflaştırmak gerekir.
Bu hedeflerin her ikisi de, en yaygın kullanılan yöntem olan katı faz ekstraksiyonu ile gerçekleştirilebilir . Bu teknikte çözelti, partiküllerle dolu bir kartuştan geçirilir ve katı fazda adsorbe edilmiş ilgili analitlerimiz uygun bir çözücü ile yıkanır. En yaygın katı faz, mikrokistinleri ve nodularinleri etkili bir şekilde tutan bir C 18 aşılanmış fazdır . Bununla birlikte, bu katı faz, daha polar olan diğer siyanotoksinler için çok seçici değildir. Son zamanlarda, bir çalışma grafit formunda siyah karbon kullanan kartuşların tutma yeteneklerini gösterdi . Bu katı faz esas olarak bir C 18 aşılanmış faz olarak işlev görür , ancak belirli koşullar altında kullanıldığında katyonik bir iyon değiştirici olarak işlev görebilir .
Mikrokistinlerin saflaştırılması ve ön konsantrasyonu için başka bir kromatografik yöntem, immünoafinite ilkelerini kullanır. Antikorların kullanımı Katı desteğe eklenen poliklonal veya monoklonal antikorlar, ilgili molekülleri seçici olarak tutabilir ve daha sonra ayrıştırılabilir.
Hayvan testleri uzun zamandır çiçeklenme toksisitesini tespit etme yöntemi olmuştur. Açıktır ki, bu yöntemler seçicilik ve duyarlılık açısından zayıftır. Bu testler artık sadece toksinlerin etki mekanizmasını anlamak ve maksimum tolere edilebilir günlük dozlar için standartlar türetmeye çalışmak için kullanılmaktadır.
Biyokimyasal yöntemlerMikrokistinlerin ve nodularinlerin tespiti, toksisite mekanizmaları ile ilgili olan biyokimyasal aktiviteleri kullanılarak gerçekleştirilebilir. Bu moleküller, hücre içi fosfoproteinlerin defosforilasyonunu gerçekleştiren fosfataz benzeri proteinlerin (PP1 veya PP2A) inhibitörleridir . Bu, sabit bir substrat miktarı ile farklı mikrokistin / nodularin konsantrasyonlarının bir fonksiyonu olarak sabit miktarda fosfataz aktivitesinin ölçülmesini içerir. Başlangıçta, kullanılan substrat bir 32P radyoizotop idi , ancak radyoaktif materyalin kullanımıyla ilişkili sorunların üstesinden gelmek için spektrofotometrik olarak tespit edilebilir bir substrat kullanan varyantlar geliştirildi.
Anatoksin-a (S) 'nin asetil kolinesteraz enzimi üzerindeki aktivitesi yoluyla saptanması için benzer bir test uygulanabilir . Bu test bu toksine özel değildir çünkü organofosfatlı pestisitler aynı inhibisyon gücünü gösterir. Son olarak, saksitoksinler, hücre zarında bir sodyum kanalı bloke edici olarak hareket ettikleri biyolojik aktiviteleri kullanılarak tespit edilebilir . Test, bu nörotoksinlerin, sodyum kanallarının genetik ekspresyonunu gösteren nöroblast benzeri kanser hücreleri ve sodyumun vücuttan hücre dışına çıkmasını ve geri dönüş sürecini teşvik eden iki ajan ile inkübe edilmesiyle gerçekleştirilir. Bu, bu kanalların aktivitesini en üst düzeye çıkarır ve testin hassasiyetini artırır. İnkübasyon süresinden sonra, hücrelerin hayatta kalma oranı , saksitoksin konsantrasyonunun bir fonksiyonu olarak kolorimetre ile ölçülür .
İmmünolojik yöntemlerBu yöntemler ELISA tipindedir ve tanımlanmış bir molekül üzerinde bulunan yapısal motiflerin antikorlar tarafından tanınması ilkesine dayanmaktadır . Teknik, bir enzime ( peroksidaz veya alkalin fosfataz) konjüge edilmiş bir mikrokistin ve analiz edilecek numunede bulunan bir mikrokistin arasında antikorun aktif bölgesi için rekabetin olduğu doğrudan rekabet tipindedir ; etiketleme antikor üzerindeyken teknik dolaylıdır. İnkübasyon süresinden sonra substrat eklenir ve antikorlara bağlanan mikrosistin-enzim konsantrasyonu spektrofotometrik olarak değerlendirilir . Güçlü boyama, numunede düşük miktarda serbest mikrokistin olduğunu gösterir ve bunun tersi yüksek konsantrasyonda mikrokistin anlamına gelir.
Bu yöntemler, UV ile görülebilir radyasyonun tespiti, floresan emisyonu ve absorpsiyon spektrumunun diyot dizileri (PDA) ile kaydedilmesi ve ayrıca kütle spektrometrisinde (MS) kullanılan çeşitli analizörler gibi bir dizi analizörle birleştirilmiş özel olarak kromatografik tekniklerdir. . Kromatografik teknikler, yüksek performanslı sıvı kromatografi (HPLC), gaz kromatografisi (GC) ve kapiler elektroforez (CE) varyantlarını içerir . MS'deki varyasyonlar, kullanılan analitlerin ve detektörlerin iyonizasyon tekniklerine atfedilebilir . İyonizasyon teknikleri, elektrosprey (ESI), hızlı atom bombardımanı (FAB) ve matris destekli lazer iyonizasyon-desorpsiyondur (MALDI), analizör olarak üçlü dört kutuplu (QqQ) ve uçuş süresi (TOF) kullanılır.
Ters faz HPLC yöntemleri , mikrokistinleri ve nodularinleri, toksoidleri, silindrospermopsinleri ve saksitoksinleri azalan sırada tutan hidrofobik bir C 18 sabit faz kullanır. İkincisi çok az tutulur veya tutulmaz ve tutulmalarını artırmak için genellikle bir iyon eşleştirme ajanı eklenir. Saksitoksinler, silikon dioksit ve serbest amid grubundan oluşan sabit bir fazla normal fazda HPLC'de daha iyi ayrılır .
Radyasyona dayalı tespit yöntemleri , moleküller üzerinde kromoforik grupların varlığını gerektirir . Bazı durumlarda, analite bir kromofor grubu eklemek için bir kolon öncesi veya sonrası türetme yapılması gereklidir, bu, floresans tarafından saptanan saksitoksinler durumudur .
MS yöntemlerinde iyonizasyon yöntemi olarak esas olarak ESI kullanılır ve algılama, tandem kütle spektrometresi (MS / MS) yöntemi olan üçlü dört kutuplu ile gerçekleştirilir. Üçlü dört kutuplu, istenen parçalanma modeline bağlı olarak farklı spektrum edinim modlarına izin verir. "Çoklu reaksiyon izleme" (MRM), "öncü iyon modu" ve "seçilmiş iyon izleme" (SIM) buluyoruz. Bu yöntem seti, parçalanma modeli sayesinde farklı siyanotoksin sınıflarının yapısal analoglarını tespit etmek için gerekli seçiciliği elde etmeyi mümkün kılar.
Başka bir analiz yöntemi, oksidasyondan kaynaklanan mikrokistin ve nodularinlerin bir bozunma ürününü kullanır. Bu ürün, GC / MS veya HPLC ile analiz edilir ve bir kolon sonrası türevlendirme gerçekleştirdikten sonra floresan ile tespit edilir. Bu yöntem, hayvan matrislerinde hepatotoksinlerin kovalent olarak fosfatazlara bağlanması ve sadece serbest olanların saptanması nedeniyle geliştirilmiştir. Bu nedenle, potasyum permanganat ve sodyum metaperiodat ile bir oksidasyon prosedürü , karboksilik asit MMPB'yi (2-metil-3-metoksi-4-fenilbütirik asit) amino asit ADDA'dan kurtarır .
EC yöntemleri, bir elektrik alanına maruz kalan yüklü bir molekülün hareketliliğini kullanır . Siyanotoksinler , sulu matrisin pH'ına bağlı olarak anyonik veya katyonik formda olduğundan, bunları EC ile ayırmak ve UV-vis veya MS ile tespit etmek mümkündür. İlginç bir varyasyon , sulu matrise bir yüzey aktif maddenin eklenmesini kullanır ve bu, bir sözde durağan faz olarak işlev görür. Ayrılma, yüzey aktif cisminin miselleri içindeki moleküllerin çözünmesindeki farklılıklar ve elektroforetik hareketlilikten kaynaklanmaktadır.
MALDI-TOF spektrometresi tam geliştirme aşamasındadır çünkü karışımın önceden HPLC ile ayrılmasını gerektirmez. Ek olarak, bu yöntem çok düşük bir numune kütlesinin kullanımına izin verir ve üçlü dört kutuplu gibi, ilgili parçaların tespit edilmesini mümkün kılan ürün iyonlarının (kaynak sonrası bozunma PSD) taramasını gerçekleştirmek mümkündür. Ancak bu yöntem, kullanılan matrise bağlı olarak önemli ölçüde arka plan gürültüsüne neden olur.
Aşağıdaki tablo, birkaç analitik yöntem için algılama sınırlarını göstermektedir.
Yöntem | Siyanotoksinler | Algılama sınırı |
---|---|---|
biyoanalizler (fareler) | Herşey | 1 - 200 µg |
HPLC-UV | Bireysel mikrokistinler | 0,02 µg / L |
HPLC-PDA | Bireysel mikrokistinler | 0,02 µg / L |
HPLC-MS | Bireysel mikrokistinler | 0,01 µg / L |
HPLC-floresan | Bireysel saksitoksinler | 34 µg / L |
GC-SM | Anatoxin-a | 1 µg / L |
HPLC-MS / MS | Silindrospermopsin | 0,2 µg / L |
HPLC-MS / MS | Anatoxin-a | 1 µg / L |
Fosfatazların inhibisyonu (radyoizotoplar) | Toplam mikrokistinler ve nodularinler | 0,02 µg / L |
Fosfatazların inhibisyonu (kolorimetri) | Toplam mikrokistinler ve nodularinler | 0,1 µg / L |
MMPB (GC-SM) | Toplam mikrokistinler ve nodularinler | 10 µg / g balık karaciğeri |
ELISA | Toplam mikrokistinler ve nodularinler | 0,05 µg / L |
ELISA | Anatoxin-a | 0,1 µg / L |
ELISA | Silindrospermopsin | 0,04 µg / L |
ELISA | Saksitoksin | 0,015 µg / L |
Hayvan biyoanalizleri, tüm siyanotoksinleri tespit etme avantajına sahiptir, ancak siyanobakteri sınıflarına karşı çok az seçicilik sergiler ve hatta aynı sınıftaki yapısal varyantları ayırt etmek için daha az seçicilik gösterir . Ek olarak, yanlış pozitif sonuçların varlığı ihmal edilemez ve sonuçların tekrarlanabilirliği düşüktür. Buna rağmen, bu testler, daha sonra yapılarını belirlemek için doğrulama yöntemleriyle araştırılabilen bilinmeyen siyanotoksinler dahil olmak üzere tüm siyanotoksinleri tespit etme olasılığına sahiptir.
Kromatografik yöntemler, siyanotoksinlerin farklı varyantlarının en büyük seçiciliğini ve en iyi miktar tayinini gösterir. MS ile karşılaştırıldığında daha düşük hassasiyet ve seçicilik göz önüne alındığında, radyasyon tespiti niceleme açısından daha az verimlidir. Yeni toksinlerin tam yapısını belirlemek de SM prosedürleri kapsamındadır. Sertifikalı standartların eksikliği şu anda tüm bu tekniklerin en büyük dezavantajıdır, bu da tüm siyanotoksinlerin tespit edilmediği anlamına gelir. Ek olarak, numuneler, zaman tüketen ve nispeten uzun bir yanıt süresi oluşturan önceden hazırlanmayı gerektirir.
İmmünolojik ve biyokimyasal yöntemler, hızlı yanıt süresi ve incelenen siyanotoksinin tüm varyantlarını tespit etme olasılığı açısından çekicidir. Bununla birlikte, bu zorunlu olarak yapısal varyantlar hakkında bilgi eksikliğine yol açar ve ELISA durumunda, tespit edilen mikrokistin konsantrasyonunun numunenin gerçek toksisitesiyle ilişkilendirilmesini zorlaştıran bir çapraz reaktivite riski vardır. Genel olarak, kullanılan yöntemler, ulaşılacak hedefe ve analizlerle ilgili maliyetlere bağlıdır. Bu nedenle, immünolojik ve biyokimyasal yöntemler, doğrulayıcı yöntemlerle karşılaştırılabilir bir duyarlılığı daha düşük bir maliyetle gösterir ve rutin analizler için tercih edilen yöntemlerdir. Ek olarak, teknik personelin nitelikleri, doğrulama yöntemlerine göre daha az talepkardır. Bunlar esas olarak araştırma ve geliştirme için kullanılır.
Doğrulama yöntemleri, analitik koşulların optimizasyonundan sonra analizleri en aza indirmeyi ve böylece bunları rutin yöntemler haline getirmeyi mümkün kılan çoklu toksin analiz yöntemlerinin oluşturulması olasılığını sunar.
Biyoakümülasyon gibi olayların incelenmesi ve enfekte organizmaların tüketimi üzerindeki etkisi, karmaşık matrisler içine entegre edilmiş siyanotoksinlerin ekstraksiyonu için bir protokol gerektirir. "Katı faz matris dispersiyonu" olarak bilinen bir protokol , silika , alümina ve kum gibi maddelerin adsorpsiyon özelliklerini kullanır . Böylece, matris, bir havanda adsorban ile karıştırılır ve elde edilen numune, küçük bir kromatografik kolonda biriktirilir ve analitler, seçici olarak ayrıştırılır.
Örnek hazırlama yöntemleri, özellikle bir güne kadar sürebilen katı faz ekstraksiyonu zahmetlidir. Analitlerin yanıt süresini optimize etmek için, kromatografik aparatın modifikasyonu, saflaştırma ve ön konsantrasyonun otomatik olarak gerçekleştirilmesi için gerçekleştirilebilir. Bunu yapmak için, bir vana sistemi ile analitik kolona bir yük kolonunun bağlanması gereklidir. Daha sonra, sıvı numune, kromatografik sistemden bağımsız pompalar kullanılarak yükleme kolonunda elüe edilir ve analitler, seçici olarak burada adsorbe edilirken, eluent ve kontaminantlar atılır. Daha sonra, valfleri, besleme sütunu analitik sütunun akış aşağısında olacak şekilde değiştiririz ve analitlerimizi analitik sütun içinde ayrıştırmak için kromatografik sistemin pompalarını kullanırız. Bu, toplam analiz süresini önemli ölçüde azaltmayı mümkün kılar, yani numune başına bir saatten daha az. Bu prosedür, atık sudaki anti-enfektif ajanların miktarının belirlenmesi için başarıyla kullanılmıştır ve siyanotoksinler için çok iyi çalışabileceği düşünülebilir.
Analitlerin yeni bir iyonizasyon yöntemi, analiz süresini, yani atmosfer basıncında kimyasal iyonizasyonla birleşen lazer diyotunun neden olduğu termal desorpsiyonu büyük ölçüde azaltabilir .
Numune, daha sonra 96 oyuklu bir deney plakasına yerleştirilen bir çözücü içerisinde çözündürülür. Çözücü kurutulur ve katı numune lazer bombardımanının etkisi altında buhar fazına geçer. Daha sonra, nötr gaz halindeki analitler, atmosferik basınçta kimyasal olarak iyonize edilir. Bu, üç saniyeden daha kısa bir sürede moleküler iyonlar üretir ve daha sonra on saniyeden daha kısa bir süre için kütle spektrometresi ile analiz edilir. Aşırı düşük analiz süresine ek olarak, bu yöntemin avantajları, analitleri seçici olarak gaz fazına geçirmek için sıcaklık artış rampalarının yanı sıra bu sıcaklığı koruma süresinin programlanması olasılığıdır. Bu, kütle spektrometresi analizinden önce kromatografik ayırma ihtiyacını ortadan kaldırır. Ek olarak, matris ve çözücü kullanılmaz, bu da arka plan gürültüsünün varlığını azaltır. Bu teknoloji, sitokrom P450 inhibisyonu çalışmasında başarıyla kullanılmıştır. Bu nedenle, analitlerin ısı etkisi altında parçalanmadan önce uçucu hale gelmesi koşuluyla siyanotoksinleri bu yöntemle analiz etmek mümkün olacaktır.